不同生长期白术多糖的含量测定
2010年8月24日 10:43 作者:lunwenchina【摘要】 目的比较不同生长期白术多糖含量的动态变化，确定白术的最佳采收时期，为白术多糖的开发利用提供依据。方法用乙醇去杂和水回流提取白术多糖，于489 nm波长处用苯酚-硫酸比色法测定其含量。结果不同生长期白术多糖变化较大，其中9月底到10月底时期白术多糖的含量最高。结论以白术多糖含量为指标，不同生长期白术的最佳采收期为9月底到10月底。
【关键词】 白术; 不同生长期; 多糖; 含量测定
白术(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)为菊科(Compositae)植物白术Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎。白术为多年生草本, 栽培历史悠久,主产中国浙江省东阳、磐安一带, 是著名的道地中药材“浙八味”之一[1]，分布于浙江、江西、湖南、湖北、陕西，亦多栽培[2]。近几年以来,中国对白术的需求量大增,居全国大宗常用中药材之首。其含有白术多糖、挥发油、氨基酸等多种有效成分[3～6]，中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用[7～9],而且几乎没有毒性。但目前对白术多糖的含量测定报道还较少。因此可采用一种方法提取不同时期白术中多糖类成分，应用硫酸-苯酚比色法测定其含量[10,11]，分析并对其进行比较，考察出多糖类成分的含量特征，为确定最佳采收期、种植条件打下基础，也为白术多糖的开发应用提供参考。
1 材料、仪器与试剂
1.1 材料样品采集于浙江林学院试验地百草园，从4月份采样至10月份，每半个月一次，有4月21日，5月5日，5月18日，6月3日，6月17日，7月7日，7月24日，8月6日，8月27日，9月10日，9月25日，10月12日，10月26日共13批样品，分别对其不同药用部位进行分离，标记分装，干燥，每批取样5份，洗净，减压干燥，粉碎，再分装干燥储存得到。
1.2 仪器UV-2501型紫外可见分光光度计(日本SHIMADZU)。
1.3 试剂乙醇，无水乙醇，苯酚，硫酸(均为分析纯);对照品葡萄糖(含量测定专用)。
2 方法与结果
2.1 多糖的精制称取切片白术200 g加6倍量70%乙醇→回流2次(每次2 h)→抽滤→药渣加8倍量水→煎煮3次(每次1.5 h)→合并水煎液浓缩至400 ml→静置→上清液加乙醇调至70%静置→抽滤→沉淀加蒸馏水溶解，在上清液中加乙醇调至70%，静置→抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤→60℃真空干燥，即得精制多糖。
2.2 样品溶液的配制准确称取0.2 g白术药材粉末加70%乙醇50 ml置锥形瓶中 → 冷浸2 h → 超声20 min→ 抽滤 → 药渣挥干后加50 ml蒸馏水，置烧瓶中→回流提取1 h，滤液转移至100 ml容量瓶定容，摇匀 → 精密移取10 ml于100 ml容量瓶定容，摇匀→ 即得供试品溶液。
2.3 标准溶液的配制精密称取葡萄糖对照品10 mg，加蒸馏水，定容至100 ml容量瓶，摇匀→用移液管分别移取该溶液2，4，6，8，10 ml，并分别加蒸馏水，定容至10 ml，摇匀，即得不同浓度的对照品，标1，标2，标3，标4，标5→再分别移取1 ml于试管中，加入5%苯酚1 ml和硫酸5 ml ,摇匀，放置5 min，于40℃水浴加热20 min，测定吸光度。
2.4 检测波长的确定以水为空白，葡萄糖标准品溶液在390～590 nm波长范围内测吸光度，在489nm处有最大吸收度。见图1。
2.5 方法学考察
2.5.1 苯酚-硫酸法标准曲线在489 nm处测定各标准液的吸收度，得回归方程A=0.014 5C+0.003 9,r=0.998 5，表明葡萄糖对照品溶液在20～100 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。
2.5.2 稳定性实验取样品溶液在8h内每隔1 h测定一次吸光度，在6 h内稳定，RSD为1.31%。
图1 葡萄糖吸收光谱
2.5.3 重复性实验取白术平行样5份，结果显示RSD=2.91%，表明样品重复性好。
2.5.4 加样回收率实验在样品溶液中精密加入葡萄糖标准液(n=5)，并适当稀释，以样品液为空白，测定吸光度，计算回收率，平均回收率为100.24%，RSD为4.5%。
2.6 换算因子的测定精密称取粗制多糖100 mg于容量瓶中，加蒸馏水溶解→定容，摇匀→移取上述溶液5 ml于100 ml的容量瓶中，加蒸馏水→定容，摇匀。精密移取上述制备的溶液1 ml于试管中，加苯酚和硫酸显色，重复3次，测定每次的吸光度，从回归方程中计算出多糖供试液中葡萄糖计的浓度。按下列公式计算：换算因子f=W/CD。式中W为多糖的重量(μg);C为多糖试液中以葡萄糖计的浓度(μg/ml);D为多糖的稀释倍数。结果显示：换算因子f平均=1.22。
2.7 样品测定结果称取每批药材粉末各0.2 g，按“2.2”项制备样品溶液，精密移取样品溶液于试管中，测定吸光度，根据公式计算出样品中多糖的含量，求平均值。多糖含量(%)=CDf/W×100[ C为多糖供试液中以葡萄糖计的浓度(μg/ml);D为多糖的稀释倍数;f为换算因子;W为样品重量(g)]结果见表1，图2。表1 不同生长期白术多糖的含量测定结果
由图2可知从4月21日到6月3日白术多糖含量的变化较小呈递减;从6月17日到7月7日白术样品中白术多糖含量呈急速递增趋势;从7月24日到9月10日这段时期白术样品中多糖含量呈现缓慢递增趋势;9月25日开始到10月26日白术药材中白术多糖含量变化幅度较小且比较稳定，其中样品中白术多糖含量达到最高。以白术多糖成分为指标，综合考虑认为从9月底到10月底这段时间为白术的最佳采收期。
从4月到6月初的多糖变化认为可能与白术抽薹，以地上部分生长为主;从6月份到7月份白术多糖含量递增，认为此时光照、温度适宜，光合作用增强，认为与白术这个时期以长根为主;从9月底开始到10月底白术多糖含量变化较稳定，其中含量达到最高。
3 讨论
本次试验用白术多糖含量作为指标来考察，可以为白术药材质量控制提供一定的依据，为白术多糖的开发应用提供参考。以白术多糖成分为指标，认为在9月底到10月底这段时期为白术的最佳采收期。
本试验分别对同一栽培基地不同采收时期的白术样品中白术多糖进行比较研究, 而保证栽培时间和各项田间管理措施一致, 能有效地避免了因产地和各项田间管理措施不同而引起的白术多糖成分含量的差异, 使试验结果合理、可信。
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