HPLC法测定清开灵胶囊中栀子苷的含量

【摘要】  目的 建立用HPLC法测定清开灵胶囊中栀子苷含量的方法。方法 采用安捷伦Agilent 1100型高效液相色谱仪,Gracesmart C18色谱柱,检测波长238 nm,以乙腈-水(15∶85)为流动相,流速为1.0 mL/min。结果 线性范围0.060 4～0.302 0 g(r＝0.999 8)；平均回收率为98.73%(n＝10),RSD＝1.61%。结论 本方法准确可靠,可用于清开灵胶囊中栀子苷含量的测定。学术论文发表 中国论文网i-C7nr/MJ

^Ba)G8\/~F/m\[0【关键词】  高效液相色谱法；清开灵胶囊；栀子苷；含量测定中国论文网\'_id['[/X
中国论文网:vRH?8GdV
    Abstract：Objective To establish a HPLC method for determination of geniposide content in Qingkailing Capsule. Methods HPLC with Gracesmart C18 was used and detection wavelength was 238 nm with acetonitrile-water (15∶85) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min. Results The standard curve was linear over the range of 0.060 4～0.302 0 μg (r＝0.999 8). The average recovery was 98.73%, and RSD was 1.61%. Conclusion This method is reliable, accurate and suitable for the determination of geniposide in Qingkailing Capsule.
;E6b{{dQZ?"C+p0   中国论文网om2\+[(Q$ZH o
Yjn
　　Key words：HPLC；Qingkailing Capsule；geniposide；content determination中国论文网2aD'M:b l+bx9Zz~n T
 
qIN}YoU[[0    清开灵胶囊由金银花、板蓝根、栀子、水牛角、胆酸等组成,具有清热解毒功效,主治上呼吸道感染、病毒性感染、高热等症。栀子苷为栀子的主要有效成分之一, 清开灵胶囊的质量标准目前未收载栀子苷含量测定方法,为了更好控制药品质量,我们采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中的栀子苷含量,实验结果表明,该方法分离度高、重复性好,获得了满意的结果。
1^8^,VN~ p IQMrYy0
}gQ d?bv0　　1  仪器与试药中国论文网%|(M-`KGNpD{S
   中国论文网Kldu8`
　　Agilent 1100型HPLC仪,Rev.B.02.01 SR1色谱工作站,中国论文网c-Jxf4j]8I
Gracesmart C18色谱柱(250 mm×4.0 mm,5 μm)；超声波处理仪MUS/1006。栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110749-200613)；清开灵胶囊样品(广州白云山明兴制药有限公司,批号Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇为色谱纯。中国论文网!MF8|'a/a@
中国论文网p.cTc3v3{(V
t
　　2  方法与结果中国论文网Efp7j!y

*Fos#spd/I*I0　　2.1  色谱条件中国论文网-R4T(U l1}7n
中国论文网4X,n+AM J8~
    色谱柱为Gracesmart C18(250 mm×4.0 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(15∶85),检测波长为238 nm,流速为1.0 mL/min,进样量10 μL[1]。
8Y3ml5vf`nw0
GLY+{AA9i'j0　　2.2  供试溶液的制备学术论文发表 中国论文网
G7e{0~TD,?u^

ozN cH,@6w0　　2.2.1  对照品溶液的制备
\0Gsm5PS9C\f0
!Bg:~gv](x@(S0　　精密称取栀子苷对照品15.1 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取5 mL,置100 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL含15.1 μg的溶液,即得。中国论文网6S1d4YLv
中国论文网0KWD4^:axH
　　2.2.2  供试品溶液的制备
py` TU2b$M[IM0中国论文网+I%]6SH4o$~s Y
　　取本品10粒,除去胶囊壳,内容物精密称定,研细,取粉末0.25 g,精密称定,置25 mL量瓶中,加甲醇20 mL,超声处理(功率300 W,频率33 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。
T'E4Bo0X)s|/Ak0中国论文网P:Ach["i1d'D2Y%A
　　2.2.3  阴性样品溶液的制备 中国论文网6Y U Kj?,d|
N&d
　　
T3IJ$oR/r+U0　　按处方组成,取除栀子外的其余药味,按工艺要求制成不含栀子苷的清开灵胶囊,再按供试品溶液的制备方法操作,得阴性样品溶液。中国论文网
St0D9H9JVM9q-N2C8p9c
中国论文网A| }2j(r[`
　　2.3  空白试验
'l*E$c/r%At7P0
&QI2N;?`[9a0    按上述仪器和实验条件,取Mk2901批供试品溶液、阴性样品溶液、栀子苷对照品溶液分别注入液相色谱仪,测定。结果供试品色谱图中,呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,且基线平稳,分离度好,阴性样品在此保留时间无色谱峰(见图1)。中国论文网K],lP+_:\8P
2.4  线性关系学术论文发表 中国论文网_2]'T2_`-j"O+K'k/|

9T2ovux1K0    分别精密吸取浓度为0.302 mg/mL对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别吸取10 μL注入液相色谱仪,测得峰面积。以峰面积为纵坐标,栀子苷对照品进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程：Y＝1 351.973X－4.454,r＝0.999 8,在0.060 4～0.302 0 μg范围内,对照品进样量与峰面积呈良好的线性关系。中国论文网 L/m,uo L.Tg
中国论文网(`_/[pn!l lP
　　2.5  精密度试验中国论文网8X"q`8wf6m{2Jk

"M4u_)saQN0    取Mk2901批供试品溶液,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积,计算其RSD＝0.83%。结果表明仪器精密度良好。中国论文网 X;X*c2M!me2}^

!?m_\e~f}0　　2.6  稳定性试验

GW2NGhKU0
tyOQddE(d:iF0    取Mk2901批供试品溶液,按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、12 h测定峰面积,计算其RSD＝0.86%。结果表明样品在10 h内稳定。
ASA(v8Q7Jz0中国论文网&U E6wNW
　　2.7  重复性试验
V\"tMNp0
ie+j1b_f i w0    取本品内容物(批号Mk2901)10 g,混合均匀,精密称取样品5份,每份0.25 g。按供试品溶液制备方法制备,依上述测定条件测定,并计算含量,结果平均含量为1.602 4 mg/g,RSD＝1.22%。表明本法重复性好。
M C e
gi:nf!Z0
.S}6sp-E)G9nO[y0　　2.8  加样回收率试验中国论文网jUI"Pw

2r X,Z8d9S?,W0    精密量取重复性试验项下的样品0.1 g各5份,分别精密加入浓度为302 μg/mL的栀子苷对照品溶液0.5 mL,按供试品溶液制备方法处理得供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率,结果表明此色谱条件测定栀子苷含量回收率良好。见表1。表1  加样回收率试验结果（略）中国论文网aRgi8x~8v*T
 
}X8j4I)^OM|Q0　　2.9  样品测定中国论文网I.i&j}b)EY

O"eS-D9`[0    分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,依上法测定,即得。依上述色谱条件测定Mk2901、Mk2902、Mk2903批清开灵胶囊中栀子苷含量,结果见表2。表2  栀子苷含量测定结果(略)中国论文网f\8Wz DL[H g

]_A$N`t0　　3  讨论
_p.n1XnhS-c:o0学术论文发表 中国论文网 ?3[2A+r4C*@j.KO_N.DS
    栀子苷为环烯醚萜苷类,易溶解于甲醇等溶剂,溶解时采用超声处理,有利于促进样品中的栀子苷溶解。栀子苷在238 nm波长处有最大吸收,故选定238 nm作为检测波长。流动相比较了乙腈-水(15∶85)和乙腈-水(10∶90)系统,栀子苷主峰均可与杂质峰分离,为缩短检测时间,故选择乙腈-水 (15∶85)为流动相。
4DR!me7@xX3I0r0    本试验建立的清开灵胶囊中栀子苷含量HPLC测定方法,灵敏度、稳定性及重复性能够符合含量测定的要求,而且操作简便,可以作为清开灵胶囊生产中栀子苷含量的测定方法。中国论文网UkCI p y

y7{-|s:i%h)Z8T%L0【参考文献】
O)H-y.?-h0  　　[1] 李小敏.高效液相色谱法测定复方清肝胶囊中栀子苷含量[J].中国药业,2008,17(10)：43－44.

---

中国论文网1K^h;dc`