【摘要】 目的 研究九牛造根中的苯丙素类化学成分。方法 采用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶柱层析分离纯化技术，通过理化性质和波谱特征分离并鉴定化合物。结果 分离并鉴定了3个苯丙素类化合物：3-甲氧基-4-羟基反式苯丙烯酸正十六醇酯(Ⅰ)，短叶苏木酚酸乙酯(Ⅱ)，3′(S)-当归酰氧基-4′(S)-千里光酰氧基凯林内酯(Ⅲ)。结论 以上化合物均为首次从该植物中得到，其中化合物Ⅲ为首次从大戟科中分离得到。
核心期刊发表论文 中国论文网/l6X a}{4WlX$K#B中国论文网 M(^jB(MC【关键词】 九牛造 苯丙素 化学成分
P+n9v&W
C3kb.O c0中国论文网]#U:Z _5}[`(}K)i ABSTRACT: Objective To study the phenylpropanoid constituents from the roots of Euphorbia hylonoma Hand-Mazz. Methods The chemical constituents were isolated and purified by silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography, and the structures were elucidated on the basis of chemical properties and spectral data. Results Three phenylpropanoid constituents were isolated from the acetone extracts of the roots of Euphorbia hylonoma Hand-Mazz, which were hexadecyl-3-methoxy-4-hydroxybenzeneacrylate Ⅰ, ethyl brevifolincarboxylate Ⅱ and (+) 3′-angeloyl-4′-isovalerylcis-khellactone peuformosin Ⅲ. Conclusion The above compounds were isolated from Euphorbia hylonoma Hand-Mazz for the first time, and the compound Ⅲ was the first obtained from the Euphorbiaceae.
中国论文网5Lt(@7o {5z+f*q Z中国论文网P2V
D#w{XyL8n9J$z$c KEY WORDS: Euphorbia hylonoma Hand-Mazz; phenylpropanoid; chemical constituent
核心期刊发表论文 N y.z(_)E}5l&B0中国论文网6P l.^!DO 九牛造原植物为大戟科植物湖北大戟(Euphorbia hylonorma Hand-Mazz)，又名翻天印，震天雷，作为民间草药，首载于《陕西中草药》。九牛造为多年生草本，主要以根入药，具有消积破癖、止痛、通便利水等功效，用于治疗肝硬化腹水、消化不良、跌打损伤、疾血作痛、二便不通、积聚腹胀、无名肿毒等。实验证明九牛造根具有一定的生物致死活性，其氯仿提取物对7721肝癌细胞具明显的抑制作用［1］。九牛造在我国主要分布于陕西、湖南、湖北、四川、贵州等省。陕西主产于秦岭南坡、汉中及安康地区各县，秦岭北坡及太白山也有分布，资源丰富［2］。前期化学成分研究表明,九牛造根中含有萜类、甾体和鞣质等类成分［3-6］。本研究报道从九牛造根丙酮提取物中分离得到的3个苯丙素类化合物，分别鉴定为3-甲氧基-4-羟基反式苯丙烯酸正十六醇酯(hexadecyl-3-methoxy-4- hydroxybenzeneacrylate Ⅰ)、短叶苏木酚酸乙酯(ethyl brevifolincarboxylate Ⅱ)、3′(S)-当归酰氧基-4′(S)-千里光酰氧基凯林内酯((+)3′-angeloyl-4′-isovalerylcis- khellactone，peuformosin Ⅲ)。
@(k-|N'B |0中国论文网(X)M&{ Bz|*a 1 材料与方法
w
DQ0K4d/V9g$T0
I2h8S/F4tLW1t0 1.1 仪器、试剂及药材
"G+D*}#K'x!^
RTS0g3P0.J4I5w,Q5Y9CO0 熔点测定用MP-J3型显微熔点测定仪，温度计未校正。NMR谱用ARX-300、ARX-500型核磁共振仪测定。红外光谱用FTIR- 8400S型(日本岛津)红外光谱测定仪测定，溴化钾压片；ESI-MS用Agilent 1100 Series LC-MSD Trap质谱仪测定；薄层硅胶G60、GF254和柱层硅胶(100-200目)为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH-20为上海化学试剂采购供应站试剂厂产品，试剂均为分析纯。
核心期刊发表论文 `@7a,?^3h0&?i h5^/MD `0 九牛造药材采自陕西太白山，经西北农林科技大学植物标本馆吴振海教授鉴定为大戟科植物湖北大戟(Euphorbia hylonorma Hand-Mazz)。
中国论文网0R jl C H t1W4v4c~Qi\x'C0 1.2 提取与分离
!Jp&C_BP Wq09I:X9O }:T0 九牛造根1.5 kg，粉碎，丙酮浸提两次，每次24 h，提取液合并，回收试剂，得到丙酮提取物300 g，取100 g经反复常压硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(100∶1-1∶100)洗脱，再经Sephadex LH-20柱层析，得到化合物Ⅰ-Ⅲ。
核心期刊发表论文 中国论文网eW.j)R-ev3?W4vG!OA+q5D-yi0 2 结 果
中国论文网 g0@p-y7f7R:m&U U9Tb中国论文网6W7T x7p3?4H
BC 2.1 化合物Ⅰ的结构鉴定
"U L&my(n.K8Q0中国论文网8G(E
\?4{DW 白色针状结晶，mp62-64 ℃，FeCl3反应阳性。ESI-MS显示其分子离子峰［M］+为m/z 418.95，结合1HNMR和13CNMR波谱数据得知该化合物的分子式为C26H42O4。1HNMR(CDCl3)δppm 6.89(1H, d，J=8.05 Hz)、7.05(1H,dd, J=8.05 Hz)和7.01(1H,s)为3个芳香质子信号，提示Ⅰ含有苯环，且为1，2，4-三取代苯的形式。δppm 6.27(1H，d，J=15.9 Hz)和7.59(1H，d，J=15.9 Hz)说明苯环连有一个反式双键,δppm 3.91(3H，s)提示苯环连有甲氧基，δppm 5.81(1H，s)示为Ph-OH，δppm 4.16(2H，t，J=6.5 Hz)为-O-CH2信号，δppm 1.67(2H，t，J=6.8 Hz)为2′-CH2信号，δppm 1.23处出现多个CH2信号，δppm 0.86(3H，t，J=6.5 Hz)出现一个甲基信号，提示Ⅰ可能为取代苯丙烯酸的直链饱和脂肪酸酯。13CNMR(CDCl3)及DEPT谱中δ167.3的季碳显示该化合物中的羰基为酯羰基，δ147.9、146.7两个季碳为苯环连氧碳信号，δ127.1季碳为苯环连烯碳信号，δ144.5、122.9、115.6、 114.6、109.2五个叔碳为苯环未取代的三个碳信号及两个反式双键碳信号，δ64.6仲碳示为连氧亚甲基碳信号，δ55.9伯碳为甲氧基碳信号，δ31.9、28.8、25.9、22.7及δ29.4仲碳强信号提示化合物具有多个亚甲基，δ14.1为甲基碳信号。H-HCOSY、HMQC及 HMBC谱显示酯羰基与反式双键相连，反式双键与苯环相连，羟基位于反式双键的对位，甲氧基位于羟基邻位。综上分析，化合物Ⅰ为取代苯丙烯酸的直链饱和脂肪酸酯。根据I的分子式，可知组成酯的醇有16个碳，化学结构确定为3-甲氧基-4-羟基反式苯丙烯酸正十六醇酯。该化合物为首次从该植物中得到。
核心期刊发表论文 中国论文网 ]}$u$f*P1O*NtW3O(Zf
mh0 2.2 化合物Ⅱ的结构鉴定
中国论文网ak"r L
C#xnk.nW中国论文网v'zN/U4r6W]
z 黄色针晶(甲醇)，mp>300 ℃，FeCl3反应阳性。IR(KBr)cm-1：3 455、3 227(-OH)、1 736(C=O)、1 697(C=O)、1 663(C=O)、1 600、1 581、1 389(芳环)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：10.90(1H，s)、10.11(2H，s)为酚羟基质子信号，7.30(1H，s)为芳环质子信号，提示苯环为5取代，4.08(2H，q，J=7.2 Hz)、1.17(3H，t，J=7.2 Hz)提示为-O-CH2-CH3质子信号。13C NMR(DMSO-d6，75 MHz)δ：192.61为酮羰基碳，171.59、159.69为酯羰基碳信号，且有一内酯结构；149.15、145.32、143.20、 139.74、138.08、114.46、112.52、107.55为烯碳信号，提示苯环与双建共轭存在；60.14为连氧碳信号，40.24、 36.56、13.44为脂肪碳信号。DEPT 谱显示107.55、40.24为叔碳，60.14、36.56为仲碳，13.44为伯碳甲基信号，其余碳均为季碳。H-HCOSY谱图提示δ2.98质子与δ4.40及δ2.47质子相关，δ4.08质子与δ1.17质子相关。综合以上分析，化合物Ⅱ确定为短叶苏木酚酸乙酯(ethyl brevifolin carboxylate)。该化合物为首次从该植物中分离得到，其 1H NMR和13C NMR数据与文献基本一致［7］。1HNMRδ：10.90(1H，s，8-OH)、10.11(2H，s，9-OH，7-OH)、7.30(1H，s，H-8)、 4.40(1H，d，J=7.2 Hz，H-3′)、4.08(2H，q，J=7.2 Hz，-O-CH2-CH3)、2.98(1H，dd，J=7.2，8.0 Hz，H-2′)、2.47(1H，dd，J=19.2，8.0 Hz，H-2′)、1.17(3H，t，J=7.2 Hz，-O-CH2-CH3)。13CNMR δ：192.61(C-1′)、171.59(C-4′)、159.69(C-1)、149.15(C-7)、145.32(C-3)、 143.20(C-5)、139.74(C-6)、138.08(C-4)、114.46(C-10)、112.52(C-9)、107.55(C- 8)、60.14(-O-CH2-CH3)、40.24(C-3′)、36.56(C-2′)、13.44(-O-CH2-CH3)。
中国论文网-[u&b+Rn _2.3 化合物Ⅲ的结构鉴定
中国论文网*`9IH4t7WRK中国论文网-X R.?8wu7dx 黄色粉末状结晶，mp 137-139 ℃。紫外灯下呈蓝紫色荧光，异羟肟酸铁反应呈阳性。UV λmax(甲醇)：322.50、220.50处有最大吸收，显示α-吡酮环和有氧取代苯环。以上表明化合物Ⅲ可能是香豆素类化合物。 IRνKBrmaxcm-1：1 730.03提示有羰基，2 935.46、2 923.88、1 488.94、1 608.52、1 456.16提示有苯环，1 647.10、840.69提示侧链的取代基部分中有亚异丙烯基，而无异丙基存在。ESI-MS谱在m/z 449处给出［M+Na］+离子峰，表明化合物的分子量为426。结合1H-NMR，13C-NMR及DEPT谱等推断其分子式为C24H26O7。 1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ：6.28(1H，d，J=9.5)和7.98(1H，d，J=9.5)以及 6.88(1H，d，J=8.5)和7.64(1H，d，J=8.5)处的两对双重峰，为香豆素类化合物的典型特征，它们分别为C-3和C-4以及芳环上两个邻位C-5和C-6的质子的信号，这些信号的化学位移值和偶合常数提示此化合物为二氢吡喃香豆素。 6.47(1H，d，J=5)、5.30(1H，d，J=5)信号提示吡喃环上有两个相邻的次甲基质子信号。6.16(1H，m，J=1，7)和 1.78(3H，d，J=1)、1.88(3H，d，J=7)是双键质子和烯碳上两个甲基质子的信号，说明含有一个当归酰氧基。 5.62(1H，q，J=1)，2.07(3H，d，J=1)，1.85(3H，d，J=1)为千里光酰氧基质子信号。1.40(3H ，s)、1.37(3H ，s)为吡喃环中C-2′上的两个偕二甲基质子信号。 13CNMR(DMSO-d6)δ：给出了24个碳原子，165.91、164.80、159.67为三个季碳，其中159.67为香豆素内酯环的羰基信号，165.91、164.80为酯羰基碳原子信号，100-160范围内有多个芳香碳原子信号及烯碳原子信号，提示该化合物含有苯环。77.49、 70.24、59.59为连氧脂肪碳信号，15.73、20.20、20.27、22.42、25.35、27.15为六个甲基信号。DEPT谱提示化合物含有6个甲基，8个次甲基，10个季碳。HMQC谱提示δ15.73甲基与δ1.88的氢信号相关，δ20.20甲基与δ1.78的氢信号相关，δ139.40次甲基与δ6.16的氢信号相关，此为当归酰氧基；δ20.27甲基与δ2.07的氢信号相关，δ27.15甲基与δ1.85的氢信号相关，δ115.13次甲基与δ5.62的氢信号相关，为千里光酰氧基；δ114.36次甲基与δ6.88的氢信号相关，δ130.43次甲基与 δ7.64的氢信号相关，分别为苯环上C-5和C-6；δ112.87次甲基与δ6.28的氢信号相关，δ144.74次甲基与δ7.98的氢信号相关，分别为C-3和C-4。δ22.42和δ25.35甲基与δ1.40、1.37的氢信号相关，为C-2′位上的偕二甲基；δ70.24次甲基与δ5.30 的氢信号相关，δ59.59次甲基与δ6.47的氢信号相关，为吡喃环上的C-3′和C-4′。HMBC谱提示δ6.28(1H，d，J=9.5)处的次甲基质子信号与δ159.67的季碳远程相关；δ7.98(1H，d，J=9.5)处的次甲基质子信号与δ107.12、112.76、153.72、 159.67处的季碳以及130.43处的次甲基碳远程相关；δ7.64(1H，d，J=8.5)处的次甲基质子信号与δ107.12、112.76、 153.72、156.33处的季碳以及144.74处的次甲基碳远程相关；δ6.88(1H，d，J=8.5)处的次甲基质子信号与δ107.12、 156.33处的季碳以及112.87、59.59处的次甲基碳远程相关；δ5.30(1H，d，J=5) 处的次甲基质子信号与δ22.42、25.35处的甲基质子，77.49、165.91处的季碳以及59.59处的次甲基碳远程相关，说明当归酰氧基连接在吡喃环的3′位；δ6.47(1H，d，J=5)处的次甲基质子信号与77.49、112.76、164.80、153.72、156.33、 107.12处的季碳以及70.24处的次甲基碳远程相关，说明千里光酰氧基连接在吡喃环的4′位；δ6.16(1H，m，J=1，7)处的次甲基质子信号与165.91处的季碳以及15.73，20.27处的甲基碳远程相关；δ5.62(1H，q，J=1)处的次甲基质子信号与164.80处的季碳以及 27.15，20.20处的甲基碳远程相关。1H-1H COSY谱提示δ6.28(1H，d，J=9.5)处的次甲基质子与δ7.98(1H，d，J=9.5)处的次甲基质子互为相关，δ7.64(1H，d，J=8.5)处的次甲基质子与δ6.88(1H，d，J=8.5)处的次甲基质子互为相关。它们分别为C3和C4以及芳环上两个邻位C5和C6的质子的信号；δ5.30(1H，d，J=5) 处的次甲基质子与δ6.47(1H，d，J=5)处的次甲基质子互为相关，分别为吡喃环上的C-3′和C-4′质子；δ6.16(1H，m，J=1，7) 处的次甲基质子与δ1.88(3H，d，J=7) 处的甲基质子互为相关；δ5.62(1H，q，J=1) 处的次甲基质子与δ2.07(3H，d，J=1) 处的甲基质子互为相关，同时又与δ1.85(3H，d，J=1) 处的甲基质子互为相关，为千里光酰氧基信号。NOESY谱提示δ6.28(1H，d，J=9.5)处的次甲基质子与δ7.98(1H，d，J=9.5) )处的次甲基质子互为相关；δ7.64(1H，d，J=8.5)处的次甲基质子与δ6.88(1H，d，J=8.5)处的次甲基质子互为相关；δ5.30(1H，d，J=5) 处的次甲基质子与δ6.47(1H，d，J=5)处的次甲基质子以及1.40(3H，s)处的甲基相关。另外，δ6.47(1H，d，J=5)处的次甲基质子还与1.37(3H，s)处的甲基相关；δ6.16(1H，m，J=1，7) 处的次甲基质子与δ1.88(3H，d，J=7)处的甲基质子以及δ1.78(3H，d，J=1) 处的甲基质子互为相关；δ5.62(1H，q，J=1)处的次甲基质子与δ1.85(3H，d，J=1)处的甲基质子互为相关。综合分析以上数据，并与文献［8］对比，化合物Ⅲ结构确定为3′(S)-当归酰氧基-4′(S)-千里光酰氧基-凯林内酯((+)3′-angeloyl-4′ -isovalerylcis-khellactone，peuformosin)。1HNMR、13CNMR、HMBC、COSY以及NOESY谱数据归属见表1。该化合物为首次从大戟科植物中分离得到。表1 化合物Ⅲ的NMR数据（略）
1L9amwn(m'H7Mk O0核心期刊发表论文 (a CaX[;v'E0 3 讨 论
中国论文网k2V\#B%ASb中国论文网K2s&t l/B OB 民间药潜在的药用研究及开发价值已逐渐被人们所认识，引起了医药科研工作者的浓厚兴趣和广泛的关注。研究民间药发挥作用的物质基础-化学成分是中药现代化的组成部分。本研究在对民间药九牛造进行药效研究的基础上，对存在其中的苯丙素类化学成分进行了提取和分离，得到的3个化合物均具有一定的生物活性。 Anselmi等［9］对具阿魏酸结构的系列化合物进行了研究，表明这些化合物具有抗氧化及肿瘤预防活性，贾靓等［10］从山乌桕中亦分离得到了短叶苏木酚酸乙酯，研究表明其具有抗放线菌活性；孔令义［11］对从中药前胡中分离得到的具有凯林内酯结构的香豆素类化合物进行了系统研究，并提出从植物中分离得到的此类化合物大多C-3′和C-4′具顺式结构，并合成了C-3′和C-4′具反式结构的系列类似物。同时，证明具反式结构的此类化合物与具顺式结构的此类化合物同样具有钙离子拮抗活性。这些研究均对九牛造的进一步研究提供理论依据。
u&QR#Zm\:M0中国论文网%w"f+oO_q 致谢：质谱及核磁共振图谱由浙江大学马忠俊博士及沈阳药科大学分析测试中心测定，在此感谢。
dir+\j0ggd!a`0 g5[qL ot g)?+O Gg0【参考文献】
u+t
T0Eq1F?!I0 ［1］郭增军，李延，倪磊. 九牛造根抗肿瘤作用的初步实验研究 ［J］. 中草药, 2001,32(增刊):146-147.
-o
R4s8Ly0S mG D b0
[9K8B T p0 ［2］郭增军，吕居娴，李映丽，等. 九牛造生药学研究 ［J］. 西安交通大学学报(医学版), 1996, 17(3):313-315.
中国论文网"bS!i5m#o,O;q_PC1f RF(n5Jb
U0 ［3］郭增军，朱蓉，吕居娴，等. 九牛造化学成分的研究 ［J］. 中国中药杂志, 1995, 20(12):744-745.
中国论文网1Y lD:I,V#Y!Q`6y%~?r(LV0U0 ［4］阮汉利，张月，张勇慧，等. 湖北大戟化学成分研究 ［J］. 中国中药杂志, 2006, 31(9):742-744.
中国论文网5h5]7@FL T1P\9S*}'O g'R&U6o3t"V0 ［5］Ruan HL, Zhou XF, Zhang YH, et al. Ferulic acid esters from Euphorbia hylonoma ［J］. Pitoterapia, 2007, 78:72-73.
中国论文网C8o+gT
IA/H中国论文网3\a?(U7LT&}*sS R ［6］郭增军，佐建峰，卜筱茜，等. 九牛造化学成分的研究 ［J］. 中药材, 2007, 30(4):412-415.
*x7ck%kkVj0中国论文网&Y3^!U
Wh ［7］Gottlieb HE, Kumar S, Sahai M, et al. Ethyl brevifolin carboxylate from Flueggea microcarpa ［J］. Phytochemistry, 1991, 30(7):2435-2438.
,m \ zM
V1w!KOoN0/h.s6uVd0H nv0 ［8］孙汉董，林中文，钮芳娣. 伞形科植物研究(Ⅵ)-长前胡的化学成分(第二报) ［J］. 云南植物研究, 1983, 5(4):433-436.
B6K]fQwR0中国论文网7n2}%`k } ［9］Anselmi C, Centini M, Granata P, et al. Antioxidant activity of ferulic acid alkyl esters in a heterophasic system: A mechanistic insight ［J］. J Agric Food Chem, 2004,52(21):6425-6432.
中国论文网
V/R:Dnj4f中国论文网 Y^L7d7d ［10］贾靓，施瑶，刘晓燕，等. 山乌桕化学成分研究(Ⅱ) ［J］. 中成药, 2007, 29(7):1043-1045.
9c9e7~z
IG _8V8b D F0中国论文网Se#E q6S{8rW ［11］孔令义，吴献礼，闵知大. 白花前胡丙素C-3′和C-4′反式结构类似物的半合成 ［J］. 药学学报, 2003, 38(5):358-363.
发给朋友
分享到朋友圈
回顶部