高效液相色谱法测定术后饮中橙皮苷的含量

【摘要】  目的 建立术后饮中橙皮苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为CenturySIL C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(21∶79),流速为0.8 mL/min,检测波长为284 nm,柱温为室温,进样量为20 μL。结果 橙皮苷浓度在1.004～10.04 μg范围内线性关系良好,平均回收率为98.59%,RSD＝0.72%。结论 方法简便、准确、重复性好,可作为术后饮中橙皮苷的含量测定方法。中国论文网]5w!IfmTKp
学术论文发表
R@%Ecn5[0【关键词】  高效液相色谱法；术后饮；橙皮苷；含量测定中国论文网Dq4Zygy9gX-q A5t'a

u;U6xEC,Kc!BI0    Key words：HPLC；Shuhouyin；hesperidin；content determination中国论文网 QA1h!w7U*Y'A
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    术后饮系甘肃武威肿瘤医院研制的医院制剂,是由太子参、白花蛇舌草、陈皮、甘草等药味制成的合剂,具有补气理气、行气宽中、降逆下气的功能,用于手术后气血亏虚所致的腑气不通诸症的治疗。经过临床多年使用,疗效显著。为控制其质量,参考文献[1-6],采用高效液相色谱(HPLC)法对方中君药陈皮的主要有效成分橙皮苷进行了含量测定,结果方法简便、准确、重复性好,为术后饮质量标准的研究与指标的制定提供了试验依据。中国论文网}'vCB+Jl4D]:u
中国论文网A){H |+l'dY2h
　　1  仪器与试药
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XUZw/D2R
p0    SSI PC-2000型高效液相色谱仪,Model500紫外检测器,7725i手动进样阀,分析之星色谱工作站；XT120A电子分析天平(瑞士普利赛斯)；HS10260D超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司)。
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u.O(_#T8c/fI/]0    橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110721-200512,供含量测定用)；术后饮样品及缺陈皮的阴性对照样品均由甘肃武威肿瘤医院提供(批号060810,060812, 060815)。水为重蒸馏水,乙腈为色谱纯,聚酰胺为层析用试剂(80～100目),其余试剂均为分析纯。中国论文网 d/X:M-l]\k&N)i

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M0　　2  方法与结果中国论文网 x;zUO*@!J }

w j0[,r o:[tN0　　2.1  色谱条件
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GZK{9eg0    色谱柱：CenturySIL C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5 μm,大连江申分离科学技术公司)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(21∶79)；流速：0.8 mL/min；检测波长：284 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。在上述色谱条件下,橙皮苷与相邻峰达到基线分离,且阴性对照无干扰,峰形对称,分离效果良好。色谱图见图1。
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　　2.2  对照品溶液的制备
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^3zx@ J6oZk0    精密称取橙皮苷对照品25.1 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇适量,超声助溶,然后用甲醇溶解至刻度,摇匀,配成浓度为1.004 mg/mL的甲醇溶液,精密吸取2 mL置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。中国论文网,c
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Do9Y0　　2.3  供试品溶液的制备学术论文发表
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    精密量取本品10 mL,置具塞锥形瓶中,加硅藻土5 g,搅拌均匀,烘干,精密加入甲醇120 mL,称定重量,充分搅拌,超声40 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液100 mL置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣用70%乙醇100 mL使溶解并转移至分液漏斗中,加石油醚(60～90 ℃)萃取3次(50、30、20 mL),弃去石油醚液,分取70%乙醇液置蒸发皿中,蒸去乙醇,剩余水液上聚酰胺层析柱(1 cm×25 cm层析柱,称聚酰胺1.8 g,湿法装柱),先用20 mL水冲洗(6 mL/min),再加入70 mL甲醇冲洗,收集甲醇液水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中,用0.45 μm微孔滤膜过滤后备用。中国论文网9E#h9Wi M/R
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　　2.4  线性关系考察
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h:{hE#XU0    精密吸取上述橙皮苷浓度为1.004 mg/mL的甲醇溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下分别进样20 μL,测定。以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：A＝27 248 838.6C＋91 201.7,r＝0.999 7。表明橙皮苷浓度在1.004～10.04 μg范围内线性关系良好。
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Y3Ro{KKC5w0　　2.5  精密度试验中国论文网e7pE'jX:OS:{F

o4] Op0C0    精密吸取对照品溶液20 μL,重复进样5次,计算5次峰面积的RSD＝0.83%。
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　　2.6  稳定性试验中国论文网0}WO"Ymn
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    取室温放置的对照品溶液,在上述色谱条件下,于0、1、2、4、8、24 h分别进样20 μL,测定峰面积的RSD＝0.71%,表明橙皮苷甲醇溶液在24 h内稳定。
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@] d {V0　　2.7  重复性试验中国论文网QwQh|-t'S*ee+E2S
中国论文网)Na0Yk4F5E'oV
    精密量取供试品(批号060812)10 mL各5份,按“样品测定”项下操作,计算含量,结果分别为0.216 1、0.214 9、0.218 1、0.218 5、0.217 1 ㎎/mL,平均含量为0.216 9 mg/mL,RSD＝0.94%。中国论文网4p-D1D4@`"u4P
【摘要】  目的 建立术后饮中橙皮苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为CenturySIL C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(21∶79),流速为0.8 mL/min,检测波长为284 nm,柱温为室温,进样量为20 μL。结果 橙皮苷浓度在1.004～10.04 μg范围内线性关系良好,平均回收率为98.59%,RSD＝0.72%。结论 方法简便、准确、重复性好,可作为术后饮中橙皮苷的含量测定方法。中国论文网(_1EHn-JH.a`
学术论文发表 中国论文网I}u5Xd
【关键词】  高效液相色谱法；术后饮；橙皮苷；含量测定中国论文网(d]0DslQx [/A:x5j D

hM(@"x!S|0        Content Determination of Hesperidin in Shuhouyin by HPLC WANG Gang, ZHAO Liang-cun1.Wuwei Institute for Drug Control, Wuwei 733000, China；2.Gansu Wuwei Cancer Hospital, Wuwei 733000, China    Abstract：Objective To establish a HPLC method for the content determination of hesperidin in Shuhouyin. Methods Chromatographic assay was performed on CenturySIL C18-AQ (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column at room temperature. The mobile phase was acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution (21∶79). The flow rate was 0.8 mL/min. The detection wavelength was at 284 nm. The sample size was 20 μL. Results Good linear relationship of hesperidin achieved in the range of 1.004～10.04 μg. The average recovery rate was 98.59% with RSD＝0.72%. Conclusion The method is simple, accurate and stable with good reproducibility. This method can be used for determination of hesperidin in Shuhouyin.中国论文网*Y)h%l7l}2M h
中国论文网9h4a_(?r X)eF^
    Key words：HPLC；Shuhouyin；hesperidin；content determination中国论文网k4Mq5eW1mL0R2l
 
u t"nS.`c0    术后饮系甘肃武威肿瘤医院研制的医院制剂,是由太子参、白花蛇舌草、陈皮、甘草等药味制成的合剂,具有补气理气、行气宽中、降逆下气的功能,用于手术后气血亏虚所致的腑气不通诸症的治疗。经过临床多年使用,疗效显著。为控制其质量,参考文献[1-6],采用高效液相色谱(HPLC)法对方中君药陈皮的主要有效成分橙皮苷进行了含量测定,结果方法简便、准确、重复性好,为术后饮质量标准的研究与指标的制定提供了试验依据。中国论文网PR)RYso`

hgj#]+vbI/}0　　1  仪器与试药中国论文网}@,YN4hn6U.t xX

(i9Rq/C1srq.v0    SSI PC-2000型高效液相色谱仪,Model500紫外检测器,7725i手动进样阀,分析之星色谱工作站；XT120A电子分析天平(瑞士普利赛斯)；HS10260D超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司)。
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    橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110721-200512,供含量测定用)；术后饮样品及缺陈皮的阴性对照样品均由甘肃武威肿瘤医院提供(批号060810,060812, 060815)。水为重蒸馏水,乙腈为色谱纯,聚酰胺为层析用试剂(80～100目),其余试剂均为分析纯。中国论文网%H9Gh(s1ww
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　　2  方法与结果学术论文发表 中国论文网^0mF)UD_4O+p
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　　2.1  色谱条件
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    色谱柱：CenturySIL C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5 μm,大连江申分离科学技术公司)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(21∶79)；流速：0.8 mL/min；检测波长：284 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。在上述色谱条件下,橙皮苷与相邻峰达到基线分离,且阴性对照无干扰,峰形对称,分离效果良好。色谱图见图1。中国论文网1f1f&qFbJ

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w f*|!r0　　2.2  对照品溶液的制备
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    精密称取橙皮苷对照品25.1 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇适量,超声助溶,然后用甲醇溶解至刻度,摇匀,配成浓度为1.004 mg/mL的甲醇溶液,精密吸取2 mL置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
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EL+i4OM e0　　2.3  供试品溶液的制备
kJ{VD#a_-dG0中国论文网5Gde.R9|NW/w3t-h
    精密量取本品10 mL,置具塞锥形瓶中,加硅藻土5 g,搅拌均匀,烘干,精密加入甲醇120 mL,称定重量,充分搅拌,超声40 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液100 mL置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣用70%乙醇100 mL使溶解并转移至分液漏斗中,加石油醚(60～90 ℃)萃取3次(50、30、20 mL),弃去石油醚液,分取70%乙醇液置蒸发皿中,蒸去乙醇,剩余水液上聚酰胺层析柱(1 cm×25 cm层析柱,称聚酰胺1.8 g,湿法装柱),先用20 mL水冲洗(6 mL/min),再加入70 mL甲醇冲洗,收集甲醇液水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中,用0.45 μm微孔滤膜过滤后备用。中国论文网6\:DmZ,j+J6QJ

iV.Ox|0　　2.4  线性关系考察中国论文网3A jVFp9O+W

~ Ws1m.])V:A1{0    精密吸取上述橙皮苷浓度为1.004 mg/mL的甲醇溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下分别进样20 μL,测定。以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：A＝27 248 838.6C＋91 201.7,r＝0.999 7。表明橙皮苷浓度在1.004～10.04 μg范围内线性关系良好。中国论文网f%y%^~7{

8R;K?J-W,R7Z`9VY3Y`1Q0　　2.5  精密度试验
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    精密吸取对照品溶液20 μL,重复进样5次,计算5次峰面积的RSD＝0.83%。中国论文网:@0Cr?1e+gU
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　　2.6  稳定性试验
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    取室温放置的对照品溶液,在上述色谱条件下,于0、1、2、4、8、24 h分别进样20 μL,测定峰面积的RSD＝0.71%,表明橙皮苷甲醇溶液在24 h内稳定。中国论文网jPR-jnmY }X%?

J'z!ai+n%stE0　　2.7  重复性试验中国论文网uOv`w[

kK Z)Uw-F0    精密量取供试品(批号060812)10 mL各5份,按“样品测定”项下操作,计算含量,结果分别为0.216 1、0.214 9、0.218 1、0.218 5、0.217 1 ㎎/mL,平均含量为0.216 9 mg/mL,RSD＝0.94%。
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s8_]/H]0　　2.8  回收率试验中国论文网-qfq&fIUk1MA{

_3n4MHp0    采用加样回收法。精密量取同一批已测知含量的术后饮(批号060812,含量0.216 9 mg/mL)样品5 mL(6份),分别置具塞锥形瓶中,均分为3组,每组依次加橙皮苷对照品溶液(浓度0.220 8 mg/mL)4、5、6 mL,按供试品的制备与测定法,在上述色谱条件下进行测定,计算回收率,结果见表1。表1  回收率试验结果(略)
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O+VGXi0　　2.9  样品测定
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^u)e.P)pFe;B0    取3批样品,按“2.3”项下方法分别制得供试品溶液,分别吸取对照品及供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定，按外标法计算样品中橙皮苷的含量。结果见表2。表2  橙皮苷含量测定结果（略）中国论文网H\;D(]j/SW
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　　3  讨论中国论文网6V'[2y)V[9}9\*F*?8I
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　　3.1  橙皮苷纯化处理
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    我们曾采用有机溶媒直接萃取分离法,但乳化现象严重,不易操作。经反复试验,采用在样品中加入适量硅藻土搅匀、烘干后,用甲醇超声提取,滤液蒸去甲醇后,再用70%乙醇溶解并转移至分液漏斗中,用石油醚萃取除去脂溶性成分,最后经聚酰胺层析柱[2]进一步分离制备供试液,结果比较满意。中国论文网q,A(BD
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!H7xz0XW9Gw3_#i0　　3.2  含量测定方法考察
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~ ON-g|0    我们对供试品溶液制备的关键步骤进行了考察。①提取溶剂和提取方法的确定：试验中曾比较了甲醇水浴回流提取和超声提取,结果回流提取杂质较多,超声处理简便快速,杂质较少,超声40 min可将样品中橙皮苷提取完全。在超声提取溶剂的选择时,分别采用70%乙醇、乙醇、70%甲醇、甲醇超声提取,结果70%乙醇、70%甲醇提取液颜色较深,杂质较多；乙醇提取液颜色较浅,杂质较少,但提取率较甲醇略低。经比较后确定用甲醇作为超声提取溶剂。②超声时间的确定：平行精取样品(批号060810)6份,加硅藻土烘干后,分别精密加入甲醇120 mL,分别超声处理10、20、30、40、50、60 min,结果超声40 min,橙皮苷的提取已趋于完全,所以超声时间确定为40 min。中国论文网8yRL)U&Zg1B#xL

6y2[F2V;g9m_XJl2_0　　3.3  最佳洗脱体积的选择学术论文发表 中国论文网4DLZ#i$XMy
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    平行精密量取样品(批号060810)6份,按“2.3”项下方法操作,分别用40、50、60、70、80、90 mL甲醇洗脱,结果70、80、90 mL甲醇洗脱液中橙皮苷含量无明显变化,且对70 mL甲醇洗脱后的柱子继续洗脱,结果没有检测出橙皮苷,所以洗脱体积确定为70 mL。
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\G6D%@O,PJxx/|6KD0　　3.4  流动相的选择中国论文网8j;~E QFnOQ5WO
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    我们比较了甲醇-醋酸-水、乙腈-磷酸-水和乙腈-醋酸-水不同比例的流动相系统,结果发现,采用乙腈体系所得色谱图峰形好。本试验以乙腈-0.2%磷酸(21∶79)作为流动相,出峰时间适宜,分离效果较好。中国论文网I0J5gl:v%h/}z

U$DxDT3T8} \#E0【参考文献】
.WP$AO*~K;c#wB0  1] 张善飞,郭平平,田燕华,等.HPLC测定益胃胶囊中芍药甙、橙皮甙、甘草酸的含量[J].中成药,2001,23(4)：252－254.中国论文网"C.Ab4Tp1FZy\
中国论文网6HKYX(}8vq&e@
　　[2] 张小琼,何燕常.HPLC测定珍珠胃安丸中橙皮苷的含量[J].中成药, 2006,28(3)：447－448.
y"B5Oy[K4Q0中国论文网prU-Lk;e9n2M
　　[3] 徐韧柳,王永欣.健胃消食片质量标准研究[J].中成药,2006,28(4)：506.中国论文网-W6rc9ce8a
中国论文网PO-O"T"I?1c0N(fFr,C
　　[4] 袁金斌,周志炎.HPLC测定陈皮提取物及制剂中橙皮苷的含量[J].中成药,2006,28(3)：455－456.

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4~4TCC.~fhgTn$_0　　[5] 李红卫,李 平,焦海胜,等.乳病消片质量标准的研究[J].中成药,2006, 28(9)：1300－1303.
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　　[6] 饶春恺,谭忠军,宋 军.HPLC测定参苓健脾胃颗粒中橙皮苷的含量[J].中成药,2006,28(10)：1542－1543.学术论文发表

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