紫癜性肾炎患者血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6表达及其临床意义

【关键词】  紫癜性肾炎;肿瘤坏死因子(TNF)?α;TGF?β1;白细胞介素(IL)?6;酶联免疫吸附试验
1oJ1R7B!Av?F-Fk3b4D0
9AlV8A&ga}`U0　过敏性紫癜是一种常见的毛细血管变态反应性出血性疾病，临床特点为非血小板减少性紫癜，而紫癜性肾炎为其严重并发症，预后较差。有研究显示炎性细胞因子在紫癜性肾炎患者中表达异常。肿瘤坏死因子?α(TNF?α)和白细胞介素?6(IL?6)是促炎细胞因子，在过敏性紫癜发病中有重要作用〔1〕; 而转化生长因子?β1(TGF?β1)是具有激素样活性的多肽，存在于巨核细胞和血小板a颗粒内，在紫癜发生发展过程中具有一定促进作用〔2〕。本文拟观察紫癜性肾炎患者血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6的表达并探讨其临床意义。代理发表论文
:R6dH P3u!eu4h1P~ t:l9[0中国论文网!l U_:?;?$E;uZ/I
　　1 材料与方法
Ba"QJ2U"O0
%z"d.VD(EV n0　　1.1 临床材料 2008年1月至2009年12月我院确诊紫癜性肾炎患者53例，其中男29例，女25例，年龄24～68(平均42.1)岁，检测前均未接受激素及免疫抑制剂治疗。另选取40例过敏性紫癜患者的血清和40例正常成人血清作为正常对照组。3组性别构成、年龄、体重等因素无显著差别，具有可比性。中国论文网Onhgh3Qi8D

R&BN0p zg e"G0　　1.2 TNF?α、TGF?β1和IL?6的检测 紫癜性肾炎组及过敏性紫癜组患者在确诊次日早晨空腹抽取静脉血10 ml，经枸橼酸钠抗凝后，以3 000 r/min离心10 min，留取血浆，于零下20℃冰箱中冻存备用;正常对照组采血及保存方法同上，并均在取血后1个月内集中检测。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6表达。具体步骤：①包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(5～20 μg/ml)各0.3 ml加于微反应板每个凹孔中，37℃水浴2～3 h，贮存冰箱。②洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温?20)洗3次，每次5 min。③加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温?20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2 ml，37℃，作用1～2 h。重复洗涤1次。④加入酶结合物：每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2 ml，37℃作用1～2 h。重复洗涤1次。⑤加入0.2 ml底物溶液于每个凹孔，(O.P.D或O.T)，室温作用30 min(另作一空白对照，0.4 ml底物加0.1 ml终止剂)。⑥加终止剂：每凹孔加2 mol/L H2SO4或2 mol/L枸橼酸0.05 ml。⑦记录结果：目测或用酶标比色计测定OD 492 nm值。中国论文网\S8k.gs(f
代理发表论文
\]%hZ:D n m'u9I&M0　　1.3 统计学方法 计数资料用x±s表示，应用SAS6.12统计软件进行两组间t检验，多组间方差分析及线性相关分析。
h:hp7XV)s`-X!}0
u#D"?6eR8o7N f2y0　　2 结 果中国论文网~P;?;W&Z\R
中国论文网0I0e'S8h9l?IPa
　　2.1 TNF?α、TGF?β1和IL?6在各组中的表达 紫癜性肾炎组患者血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6的表达较正常对照组和过敏性紫癜组明显增高(P<0.01,P<0.05)，过敏性紫癜组与正常对照组间血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6的表达亦有显著差异(P<0.05)，见表1。表1 各组TNF?α、TNF?β1和IL?6表达水平比较(x±s)与正常对照组比较：1)P<0.01，2)P<0.05;与过敏性紫癜组比较：3)P<0.05中国论文网5rCio#d _*RYp#V
中国论文网+{6t0pvZ u*ah.\F
　　2.2 紫癜性肾炎组不同类型患者TNF?α、TGF?β1和IL?6表达的比较 紫癜性肾炎组中重型TNF?α、TGF?β1和IL?6的表达明显高于轻、中型(P<0.05)，见表2。表2 紫癜性肾炎组不同类型患者TNF?α、TGF?β1和IL?6表达水平比较(x±s)
6C^)V$l h0中国论文网0c"R1h)KV(gC(f
　　2.3 紫癜性肾炎组患者血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6表达的关系 经线性相关分析显示，紫癜性肾炎组中TNF?α和IL?6呈正相关(r=0.51,P<0.05)。而紫癜性肾炎组中TNF?α和 TGF?β1、TGF?β1和IL?6的表达未见明显相关性(P>0.05)。中国论文网XO*F-pW
3 讨 论代理发表论文
J.L'eu#a0中国论文网
nQ$oApeM D
　　过敏性紫癜临床常见，紫癜性肾炎是免疫复合物介导的系统性小血管炎，血管壁因免疫损伤而通透性升高，血液淋巴渗出，同时可引起皮肤黏膜、内脏器官等多部位病变。有观点认为免疫复合物在多脏器小血管壁和肾小球基底膜上沉积，激活补体释放各种细胞活性因子、过敏素，诱发无菌性小血管炎症，增加其通透性，从而导致包括肾脏在内的多脏器炎症反应〔3〕。TNF?α是由单核?巨噬细胞分泌的具有多种生物活性的多肽调节因子，既参与机体的免疫防御功能，又作为机体的炎症、损伤、甚至休克发病的重要介质，过敏性紫癜患者可通过Ⅰ、Ⅲ型变态反应，损伤毛细血管内皮细胞，使TNF?α分泌增加〔4〕。IL?6是由活化的单核?巨噬细胞、活化的T细胞、B细胞、内皮细胞、成纤维细胞和肾小球系膜细胞等产生，其主要的生物功能有诱导B细胞分化和IgG的分泌，刺激各种细胞增殖，诱导巨核细胞成熟，使炎症时血小板数量增高，促进过敏性紫癜的发展〔5〕。适量的TNF?α参与机体的正常免疫调控，但过量的TNF?α则作为一种炎性介质和休克介质，参与免疫病理损伤，而过敏性紫癜急性期时TNF?α表达增高〔6〕。TGF?β1是经双硫键联结的具有多种生理功能的多肽，是转化生长因子β的一种异构体，在多种疾病发生发展中具有重要的作用。中国论文网h!VJ@2W'\"LKB"[
中国论文网E9~v Vp2n
　　本实验结果提示TNF?α、TGF?β1和IL?6在紫癜性肾炎发生发展中具有重要作用。由于分型与病情轻重有关，而TNF?α、TGF?β1 和IL?6在重型中高表达，因此，其表达增高，可能提示预后不良，早期联合检测TNF?α、TGF?β1和IL?6可能对判断紫癜性肾炎病情有一定价值。 IL?6和TNF?α呈正相关性，提示二者可能存在协同作用。由于肾炎后形成的免疫复合物、内毒素均可刺激单核巨噬细胞系统和血管内皮细胞不断产生 TNF?α和IL?6等因子，通过直接启动炎症反应或通过刺激其他炎症介质的释放，触发级联反应，导致患者血清中TNF?α和IL?6水平明显升高。在紫癜性肾炎发生发展中，细胞因子的明显变化，主要源于TNF?α作为核心因子起的作用，并诱导IL?6释放。因此，治疗中可以针对IL?6及TNF?α的协同作用进行阻断，或根据患者的免疫状态，调控炎症反应进行治疗。代理发表论文 中国论文网kE6m9dN"G*H[fP-v

5H+\0l~2Ob0　　总之，紫癜性肾炎患者血清中TNF?α、TGF?β1和IL?6表达增高，3种蛋白可能参与紫癜性肾炎的发生发展，TNF?α和IL?6具有协同效应，联合检测TNF?α、TGF?β1和IL?6的表达可能对判断病情严重程度有一定意义。中国论文网%LZi4k-E)J'{
中国论文网rl8O SbAI.X%C'Q
【参考文献】
-dR#I2Y7DRC r0  　1 Del Vecchio GC，Penza R，Altomare M,et al.Cytokine pattern and endothelium damage markers in Henoch?Schonlein purpura〔J〕. Immunopharmacol Immunotoxicol，2008;30(3)：623?9.中国论文网x x%qVXG.u"_4Z1y
中国论文网"`5zn^+r
　　2 于红芳，鞠秀丽，高欣义，等.ITP患儿TGF?B1、TPO变化的临床意义〔J〕.山东医药，2007;47(16)：68.

Y7Tud2]g|-M0中国论文网b5M4`z3tj-a
　　3 Endo M，Ohi H，Ohsawa I,et al.Complement activation through the lectin pathway in patients with Henoch?Sch?nlein purpura nephritis〔J〕.Am J Kidney Dis，2000;35(3):401?7.代理发表论文 中国论文网#iH v?c-k%J

%PJV:`:^S0　　4 Nakajima M，Kawahara S，Sakagami Y,et al.Immunogold labelling of cytokines in glomeruli in children with various renal diseases〔J〕.Nephron,1999;83(2):132?8.中国论文网w:n-LxRxZ

roC%b9E aI|e0　　5 Ha TS.The role of tumor necrosis factor?alpha in Henoch?Schonlein purpura〔J〕.Pediatr Nephrol，2005;20(2):149?53.中国论文网8{LY)y k.cL
中国论文网 f6YP+kzKM.A0AI
　　6 YH Yang，YH Chuang，LC Wang,et al.The immunobiology of Henoch?Sch?nlein purpura〔J〕.Autoimmun Rev，2008;7(3):179?84.

---