莱菔子水溶性生物碱对ApoE基因敲除小鼠内皮细胞的抗氧化保护作用

【摘要】  　　目的 探讨莱菔子水溶性生物碱对ApoE基因敲除小鼠内皮细胞抗氧化保护作用。方法 将50只ApoE基因敲除小鼠随机分为5组：模型组、莱菔子水溶性生物碱高、中、低剂量组、血脂康组，每组10只；另取10只C57BL/6J作为空白组。8 w后，眼球取血处死，随机选取6个样本检测指标。结果 与模型组相比，莱菔子各剂量组均能明显提高ApoE基因敲除小鼠血清NO含量(P＜0.05)；提高血清SOD的活性（P＜0.05）；降低血清 MDA（P＜0.01）含量。结论 莱菔子水溶性生物碱通过提高ApoE基因敲除小鼠血清NO含量、提高SOD活性、降低MDA含量，发挥抗氧化作用，从而保护内皮细胞。期刊论文发表
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【关键词】  莱菔子水溶性生物碱；ApoE基因敲除小鼠；抗氧化中国论文网(i_m7iG
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　　莱菔子是十字花科植物萝卜(Raphanus sativus L.)的干燥成熟种子，在《日华子本草》中记为萝卜子。其性味辛、甘、平，归肺、脾、胃经，主要功效为降气化痰，消食除胀。《本草纲目》记载：“莱菔子长于利气”。莱菔子水溶性生物碱以芥子碱(Sinapine)为主要成分，广泛存在于十字花科植物中的一种季胺盐物质。本实验通过观察莱菔子水溶性生物碱对载脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠血清一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)影响来探讨莱菔子水溶性生物碱抗动脉粥样硬化（AS）作用的机制。
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　　1  材料与方法
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aiP&H0rm0　　1.1  实验材料
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1c a`{"H;A0c,j$X0　　1.1.1  药品制备
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h xpc*X\0　　莱菔子水溶性生物碱，由吉林省中医中药研究院新药中心制备。
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q#H)y$lE_8]0　　1.1.2  实验动物 中国论文网-qj;?aOT

NOk!Soo s0　　北京维通利华公司提供雄性ApoE基因敲除小鼠75只，雄性C57BL/6J小鼠15只，13周龄，体重（22±2）g，清洁级。中国论文网K3[Y0CKBS3t
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　　1.1.3  主要仪器及试剂 中国论文网D2A%h M*S.v#fI
中国论文网 _,zb"Q7D2F*K
　　电子记重秤AWH（SI）-2.5 kg：国产；BD/BC?518 -20℃冰箱：国产；4℃冰箱：国产；Q/IFGM018?2000低温高速离心机：德国；HH·W21·600电热恒温水浴箱，小型台式离心机：上海医疗器械厂；PERLONG；pus?2018 半自动生化分析仪：北京普朗新技术有限公司。中国论文网L)^)H4C+S/ccE*y
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　　1.1.4  基础饲料 期刊论文发表中国论文网d!en,L{)^8T6^D

0GoB3i)?S"e-u0　　玉米粉26.0％，面粉29.0％，豆粕28.0％，磷酸氢钙1.4％，石粉1.6％，鱼粉5.0％，骨粉5.0％，盐1.0％，多种维生素1.5％，多种微量元素1.5％。中国论文网`9M7`0~2b
中国论文网2XL&^[ yV LGx
　　1.1.5  肥甘饲料 中国论文网g3u!I;dK
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N}1G(K)W!czL0　　由10.0%猪油，2.0%胆固醇，20.0％蔗糖，5.0%蛋黄粉，0.2%胆盐，0.2%甲基硫氧嘧啶，62.6%基础饲料配制而成。
9@sl&rftU01.2  方法中国论文网R wHs|b

9_l6Z'PTj Is0　　1.2.1  分组及给药 中国论文网W6S,{!bVl+A
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　　将ApoE基因敲除小鼠（高脂饮食）随机分为5组，每组15只。模型组，每日灌服饮用水；莱菔子水溶性生物碱高剂量组90 mg·kg-1·d-1，莱中剂量组60 mg·kg-1·d-1，低剂量组30 mg·kg-1·d-1(分别相当于生药60、40、20 g/kg)，血脂康组0.2 g·kg-1·d-1，另取10只C57BL/6J大鼠作为空白对照组。空白对照组及模型组给等体积蒸馏水灌胃。给药时间为8 w。
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,YC\2E5L`Qa0　　1.2.2  样本的采集及检测 中国论文网"D3G9vD{$o'z
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　　给药8 w后，于末次给药后摘眼球取血处死动物。分离血清后，随机选取6个样本进行检测。NO试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。中国论文网 R O ppIT

1bh+c"qOc0　　1.3  统计学方法 中国论文网TUeu|~5B]
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　　运用SPSS13.0软件进行计算，实验数据均采用x±s表示，组间比较采用方差分析。期刊论文发表中国论文网0R7QV*@q'O&S8V

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Kac9~6@0　　2  结果中国论文网 D"})G pnX+G"Z(q-Ma
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　　治疗8 w后，各组小鼠血清NO、SOD及MDA变化比较，见表1。表1  各组治疗8 w后各项指标变化比较(略)
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　　3  讨论
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e#RGbh L0　　在AS的发生发展过程中伴随着机体氧化应激反应增强，氧自由基(OFR)产生增加，而机体具有抗氧化能力的SOD、谷胱苷肽过氧化物酶（GPX）活性及NO含量等明显降低，即抗氧化酶系的保护作用减低。OFR对血管内皮恭能的影响主要表现在〔1〕：①损伤内皮依赖的血管扩张。由于O-2灭活NO、GPX缺失等造成血管内皮功能障碍。②诱导内皮细胞凋亡。内皮损伤或暴露于O-2和H2O2诱导的细胞凋亡，以致AS发生和促凝血状态。③诱导内皮细胞黏附分子表达。④血管新生。除了对胚胎发育和创伤修复发挥生理作用外；在病理方面其可参与内皮细胞迁移、增殖和血管形成；此外，还参与血管VSMC的生长，迁移。中国论文网%{t)d2ixHig1@
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　　NO能够与脂氧化自由基直接反应而干扰低密度脂蛋白（LDL）的氧化过程，从而阻止氧化?LDL（ox?LDL）的生成及对内皮细胞的破坏。SOD是一种广泛存在生物体内的金属酶类。以O?2为底物，是清除超氧离子自由基的特效酶类。脂质氧化应激的产物为MDA。本实验结果表明，各治疗组均能增加小鼠血清NO含量；提高血清SOD活性，降低MDA的含量，其调节作用随着剂量的增加而增强，呈剂量依赖性。莱菔子高剂量组
O6B t#OcN0与血脂康组比较无显著差异。
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K7X$^!LCP0　　NO是一种理想的抗AS因子，提高NO浓度可以改善血管内皮功能〔2〕。SOD又是清除氧自由基的专一酶，因此，莱菔子水溶性生物碱可能通过这一机制而发挥抗氧化和保护内皮细胞的作用。期刊论文发表
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【参考文献】
7_~x4q&_7jy8Q0  　　1 陈 瑗，周 玫.氧化应激?炎症在动脉粥样硬化发生发展中作用研究的新进展〔J〕.中国动脉硬化杂志，2008；26（10）：757?62.
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n5yMYP}C0　　2 吴 俊,孙 明,周宏研.高脂血症对VEGF与NO浓度的影响及降脂治疗后的变化〔J〕.中国现代医学杂志，2003;1(1):12?4.期刊论文发表

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