缓激肽β2受体拮抗剂在兔体外循环中的脑保护作用

【摘要】  目的： 探讨缓激肽β2受体拮抗剂HOE?140在兔体外循环中的脑保护作用。方法： 实验兔随机分成深低温停循环下选择性逆行脑灌注组(DHCA+SCP,对照组,n=15)和深低温停循环下选择性逆行脑灌注+HOE?140组 (DHCA+SCP＋HOE?140,实验组,n=15),复温后开颅取脑组织检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、干湿重比（WDR）、肿瘤坏死因子?α（TNF?α）、白细胞介素?1β（IL?1β）、血栓素B2(TXB2)和6?酮?前列腺素F1α(6?keto?PGF1α)含量，进行组间比较。结果： 与对照组相比,实验组SOD活性明显增强,MDA和WDR均明显下降（P<0.05）; TNF?α和IL?1β均明显下降（P<0.05）；6?keto?PGF1α/TXB2比值明显升高。结论： HOE?140在深低温停循环下选择性逆行脑灌注中能明显升高6?keto?PGF1α/TXB2比值，降低缺血再灌注损伤，有明显的脑保护作用。中国论文网,s"H s+E*c;|r
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`$X yw+u+{0【关键词】  缓激肽β2受体拮抗剂； 体外循环； 深低温停循环； 脑保护； 再灌注损伤
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　　［Abstract］Objective: To investigate the protective effects of a bradykinin β2 receptor antagonist(HOE?140) on brain in a rabbit extracorporeal circulation model.Methods： Thirty rabbits were randomly divided into 2 groups:control group(DHCA+SCP),and experiment group(DHCA+SCP＋HOE?140).Brain specimens were harvested for measurement of the wet?to?dry lung weight ratio(WDR),SOD,MDA,TNF?α,IL?1β，6?keto?PGF1α,TXB2  after the experiment. Results： Compared with control group, SOD and 6?keto?PGF1α/TXB2 of the experiment group were significantly higher than control group(P<0.05), WDR，MDA, TNF?α,IL?1β6?keto?PGF1α，TXB2 of experiment group was significantly lower than control group. Conclusion： The bradykininβ2 receptor antagonist, HOE?140, can raise 6?keto?PGF1α/TXB2 ratio, ameliorate I/R injury in a rabbit DHCA+SCP model, and had a significant protection of brain.中国论文网nSUmA%e&I
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　　［Key words］  bradykinin β2 receptor antagonist； extracorporeal circulation；  brain protection； ischemia reperfusion injury； deep hypothermic circulatory arrest
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    中枢神经系统功能障碍是主动脉瘤等需要深低温停循环（deep hypothermic circulatory arrest, DHCA）手术常见且严重的并发症。由于DHCA的安全时限较短，因此延长DHCA的时间，使停循环再开放后的中枢神经系统功能受损降低到最小，是体外循环的一个非常重要的环节。DHCA后神经系统功能受损一个非常重要的机制就是脑的缺血再灌注损伤，因此降低缺血再灌注损伤显得至关重要。缓激肽是激肽释放酶-激肽系统中的一种主要的激肽类物质，已证实体内缓激肽受体有β1和β2两种。β2受体在外周分布较广，血管/非血管平滑肌及心肌细胞上均有β2 受体的存在。HOE?140是一种选择性的缓激肽β2受体拮抗剂。Kumari等［1］在猫的心脏缺血再灌注模型中，发现应用缓激肽β2 受体拮抗剂HOE?140能够减轻缺血再灌注损伤。Souza等［2］在肠系膜上动脉缺血再灌注模型中，同样证实了缓激肽β2受体拮抗剂在缺血再灌注中的保护作用。既然HOE?140在其他脏器的缺血再灌注损伤中发挥如此积极的作用，那么在深低温停循环状态下能否降低脑组织的缺血再灌注损伤呢？本实验通过建立兔深低温停循环模型来证实HOE?140的脑保护作用。中国论文网&`&U)ce/as/p

^'O k fi0    1  材料和方法
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    1.1  材 料如何发表论文 中国论文网V@s0zjL!D
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    健康新西兰大白兔30只，雌雄不拘，体质量2.3～3.1 kg［(2.7±0.3） kg］，由苏州大学实验动物中心提供，动物饲养与实验均符合卫生部《医学实验动物管理实施细则》（1998）的要求。实验前1天将兔领回，使其预先适应环境。将30只兔按随机数字表法分成对照组和实验组。中国论文网4Mk#rk&_/{uN

:?/lW)q$GKDA8\5b,W0    1.2 实验方法中国论文网0o-~*SU:x$H6c
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    静脉穿刺针经耳缘静脉缓慢注射1.25%戊巴比妥钠2 ml/kg麻醉，固定，监测心电图(ECG)、体温；颈前正中切口，气管切开插管，以纯氧7～10 ml/kg潮气量，40～60次/min的频率机械通气，氧流量1.5～2.5 L/min，右腹股沟切口分离右股动脉，插管监测平均动脉压(MAP)；右锁骨下切口分离右锁骨下动脉1～2 cm，置线备用。静脉肝素化(500 U/kg)，胸前正中切口剪开胸骨，切开心包显露心脏，右锁骨下动脉插动脉灌注管(深度约达无名动脉分叉处)，右心耳插房管建立体外循环，流量50～80 ml·kg-1·min-1，并行下降温度至鼻温28℃，阻升主动脉，心包腔内置冰屑维持局部低温，继续降温至鼻温18℃、脑温18℃～20℃时停循环。转流期间适当从耳缘静脉追加肝素用量，维持激活全血凝固时间>480 s。对照组于停循环后将右无名动脉、左锁骨下动脉及左颈总动脉阻断，右锁骨下动脉插管和恒流仪输出管连接，以12 ml·kg-1·min-1的流量行停循环，全程脑灌注；实验组在对照组基础上停循环,全程维持滴注缓激肽β2受体拮抗剂HOE?140(10 nmol/min)。40 min后恢复循环，体表、血液同时复温至鼻温30℃开放升主动脉；鼻温36℃时开颅取脑组织行各项检查。
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　　1.3  主要观察指标中国论文网:C4R"h"Nx6F

Bg6R,Wq;V"t w'v'B@0　　1.3.1  丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的测定
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　　首先将标本称重，冰浴中制成匀浆，用南京建成生物科技公司提供的试剂盒测定MDA和SOD。
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　　1.3.2  肿瘤坏死因子?中国论文网[!an'GH T
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　　α（TNF?α）和白细胞介素?1β（IL?1β）的测定  取脑组织制成匀浆，以放射免疫法测定（南京建成生物科技公司提供的试剂盒）TNF?α和IL?1β。
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　　1.3.3  脑组织血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）的测定
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　　取相同部位左侧脑组织1 g，制成匀浆，3 000 r/min离心15 min，取上清液-20 ℃保存备测。由于TXA2和PGI2极不稳定，故测其稳定代谢产物血栓素B2(TXB2)和6?酮?前列腺素F1α(6?keto?PGF1α)。
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5?xR(g%o7\r0　　1.3.4  脑干湿重比（WDR） 中国论文网K?w c F4{0}
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　　动物处死后迅速取左侧大脑中部脑组织，用吸水纸拭干，称重得标本湿重，将标本置入50 ℃恒温箱内，72 h后称重，24 h后再次称重，若超过1%，则于24 h后再次称重，直至两次称重差值不超过1%，则记录为干重。计算湿干重比（W/D）。中国论文网]%QB.Z"fDML

|IWg:g?2l0　　1.4  统计学分析
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ZN%kO%A1RO0    应用SPSS 13.0软件进行统计分析。计量资料结果以±s表示并采用t检验。中国论文网-i$I,v:^%na
2  结 果中国论文网TrcZfr nI8K
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    2.1  SOD，MDA，WDR检测结果

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9XPZ:En3P E0    与对照组比较，实验组的SOD明显升高，MDA,WDR明显降低(P<0.05)。见表1。表1  两组SOD，MDA,WDR比较（略）中国论文网1KG.TX-|7b;c` Gw
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)kC0U/z4Sjr]0    2.2  TNF?α和IL?1β的测定结果
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3p"O$U6Nl&Y\0    与对照组相比，实验组TNF?α及IL?1β含量明显降低(P<0.05)。见表2。表2  两组TNF?α及IL?1β含量比较（略）中国论文网h+x2a!W7y.`7w
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    2.3  TXB2和6?keto?PGF1α 的测定结果中国论文网b*j @X8cd2w&A

.z3dC*M4mU4yM0    与对照组相比，实验组TXB2，6?keto?PGF1α均显著降低，6?keto?PGF1α/TXB2显著增高（P均<0.05）。见表3。表3  两组TXB2和6?keto?PGF1α比较（略）
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*[W6oNBs.IE0    3 讨论中国论文网zwC:]u w4s


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lBs0    HOE?140是一种选择性的缓激肽β2受体拮抗剂，其对缺血再灌注损伤的保护作用被认为是通过与其受体的结合，而减少类花生酸产物量。缓激肽通过增加细胞内的钙离子，从而激活磷脂酶A2(PLA2)。PLA2从细胞磷脂中动员花生四烯酸［3、4］，通过环氧化物酶（COX）的作用形成PGH2［5］，而 PGH2是PGI2和TXA2的共同底物。花生四烯酸亦经脂肪氧化酶的作用形成LTA4，是白细胞三烯（LT）的底物。TXA2是缺血再灌注损伤中非常重要的物质［6-8］，能诱导血小板的聚集，刺激中性粒细胞的聚集，引起血管收缩和增加血管的通透性。在脑缺血再灌注损伤中血管收缩引起微循环障碍。它同样可引起血小板和中性粒细胞在毛细血管的聚集，进一步加重微循环障碍。一些研究表明PGI2/TXA2保持一个高比值对减少缺血再灌注损伤同样重要［9-11］ 。
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    本次实验中可见实验组脑组织匀浆中SOD水平显著升高，MDA水平显著降低，另外实验组中的TNF?α及IL?1β含量显著降低。这些指标均提示实验组的脑组织缺血再灌注损伤明显好于对照组，HOE?140有明显的脑保护作用。分析其原因，我们不难发现实验组中PGI2和TXA2的稳定代谢产物TXB2和 6?keto?PGF1α同时降低，说明了HOE?140能够同时抑制PGI2和TXA2的产生。但6?keto?PGF1α/TXB2比值的明显升高，说明HOE?140主要抑制的还是TXA2的产生，从而增加PGI2/TXA2的比值，因此能够降低缺血再灌注损伤，起到脑保护作用。中国论文网cV#k)]/fHs
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    综上可见，在兔体外循环过程中加入缓激肽β2受体拮抗剂HOE?140能有效抑制体外循环过程中脑缺血再灌注损伤，从而起到明显的脑保护作用。
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